碱性磷酸酶染色法 怎么做
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发布时间：2022-04-22 19:39
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时间：2023-11-06 15:58
本试验是一个酶组织化学试验，酶组织化学是在不破坏组织细胞的条件下，检测酶的存在，定位与活性的学科，即在酶的存在，分布及其用在显微镜下变成可见的。生命是有序的，包括时间的有序及其空间的有序。其中美的空间有序性在于其细胞组织结构的精确位置，各种酶的自己的位置保证了化学活动的有效进行。
酶的定位方法必须准确，其显示方法必须具有高度的特异性，使酶本身具有可见性，这是一种直接的方法，目前主要有免疫荧光化学法，该法敏感性高，速度快，但成本高。如果有相同的抗原决定簇时，则会有交叉反应。方法成熟，使用广泛的还是经典的组织化学方法。下面以碱性磷酸酶的显示方法来学习经典酶组织化学的理论及操作。经典酶组织化学不是显示酶本身，常采用的方法是：在一定条件下，使细胞中的酶作用于酶的底物，使其产物在原地进行捕捉、沉淀转化为有色产物。碱性磷酸酶（AKP）的显示方法最早由Gomeri（1939）提出，现在这种方法称为Gomeri法。碱性磷酸酶是指磷酸单酯酶Ⅰ，它能在pH8.6~10.0的最适条件下分解磷酸单酯，对于与磷酸相接的醇基没有特异性，Gomeri法是让该酶在碱性条件下，分解甘油磷酸钠，产生磷酸根。
在孵育液中加入CaCl2，分解产生的磷酸根离子立即被Ca2 原位捕捉形成沉淀。
HPO2-- Ca2 →→CaHPO4 ↓（无色沉淀）
因出现的是无色沉淀，故还不能在光镜下观察到，尚需转化为有色沉淀，先让制片与Co（NO3）2反应生成磷酸钴：
CaHPO4 Co（NO3）2 →→CoHPO4 ↓（无色沉淀） Ca（NO3）2
再让它与硫化铵反应生成黑色的硫化钴沉淀。
CoHPO4 （NH4）2S→→（NH4）2HPO4 CoS ↓（黑色沉淀）
我们可以在显微镜下观察到黑色沉淀的位置，由于以上的这些操作都是在原位进行的，可以认为黑色沉淀的位置就是酶所在的位置，这类方法是让酶作用于底物而将酶显示出来。因此制作酶组织切片的时候不能使酶失活，还要尽量避免酶所需的反应的产物扩散，否则不会得到正确的结果。
